「我在实验室走过最远的路，就是 WB 的弯路……」
从开始的组织研磨，到样品制备、蛋白定量……几乎所有的坑都能踩上一遍。
熟悉流程后进一步实验，依旧面临了不少问题：比如最近， 我们要在同一张膜上研究多个蛋白的表达，用什么实验方法就把我难住了。
第一时间想的是裁膜，但师兄提醒：现在越来越多的期刊要求提供未剪切的 Blot 图。
Stripping&Reprobing？师兄说：这种办法因可能存在过度 Stripping 或 Stripping 不足，从而导致准确性低和重复性低。
那怎么办？ 师兄让我尝试一下多色荧光 Western Blot。
但我知道多色荧光 Western Blot 实验有局限呀，受制于仪器、荧光抗体，通常只能同时检测 2～3 个蛋白条带，根本不够用……
现在不用纠结啦，为了扩展多色荧光 Western Blot 的应用范围， Bio-Rad 近期在其全能型成像系统 ChemiDoc MP 上开发了 5 色荧光实验方案，除去内参蛋白后，最多还可以实现 4 个目的蛋白的同时检测。
这一新的流程发表在《Current Protocols in Pharmacology》上，使用 Bio-Rad ChemiDoc MP 全能型成像系统与 5 种一抗，4 种二抗共同实现。同时检测了 USP2、AKR1C2、TP1、SOD1 四种目的蛋白，及内参蛋白 tubulin。
五荧光通道检测结果：
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五个单独通道结果：
使用的一抗及稀释比例为：
Rabbit anti-USP2 10 μL（1:2,000）
Mouse anti-AKR1C2 4 μL（1:5,000）
Biotinylated Goat anti-TP1 4 μL（1:5,000）
Chicken anti-SOD1 20 μL（1:1,000）
hFAB Rhodamine Anti-Tubulin 20 μL（1:1,000）
使用的荧光二抗/streptavidin 及稀释比例为：
StarBright Blue 700 Goat Anti-Rabbit 8 μL（1:2,500）
StarBright Blue 520 Goat Anti-Mouse 8 μL（1:2,500）
DyLight 800 streptavidin 2 μL（1:10,000）
AlexaFluor 647 Goat Anti-Chicken 2 μL（1:10,000）
具体实验流程请参考文献：
Fluorescent Western Blotting: High Sensitivity Detection of Multiple Targets, Current Protocols in Pharmacology e72, Volume 88
* 本产品仅限科研使用，不作为临床诊断。
* Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标。
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图文来源：伯乐生命科学
题图来源：站酷海洛返回搜狐，查看更多